| 出願番号 |
特願2004-045862 |
| 出願日 |
2004/2/23 |
| 出願人 |
独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 |
| 公開番号 |
特開2005-229950 |
| 公開日 |
2005/9/2 |
| 登録番号 |
特許第4214230号 |
| 特許権者 |
国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 |
| 発明の名称 |
環状ＤＮＡへのランダム変異導入方法 |
| 技術分野 |
食品・バイオ |
| 機能 |
材料・素材の製造 |
| 適用製品 |
ローリングサークル型増幅（ＲＣＡ）法を利用する環状ＤＮＡの増幅方法、環状ＤＮＡへのランダム変異導入方法 |
| 目的 |
ローリングサークル型増幅（ＲＣＡ）法を利用して環状ＤＮＡを簡便かつ迅速に増幅する方法、及び環状ＤＮＡにランダム変異を導入する方法を提供する。 |
| 効果 |
本発明によれば、ローリングサークル型増幅（ＲＣＡ）法を利用して簡便かつ迅速に環状ＤＮＡを増幅する方法、及び環状ＤＮＡに変異を導入する方法が得られる。ＰＣＲ法を利用する従来法のように、ＤＮＡ増幅のためのプライマー設計や合成、温度条件の設定、増幅産物の制限酵素処理、ライゲーション操作を行う必要がないため、作業ステップや労力が大幅に軽減される。また、作業時間も従来法では３時間以上であるのに対し、１０分程度で完了し、飛躍的に短縮される。さらに、遺伝子ライブラリーの増幅や変異体ライブラリーの構築を行うのに有用である。 |
技術概要
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環状ＤＮＡを鋳型としてローリングサークル型増幅法によりＤＮＡを増幅し直鎖状ＤＮＡからなる増幅産物を得る工程と得られた増幅産物を用いて大腸菌の原核宿主細胞を形質転換し、原核宿主細胞内で独自に複製可能なプラスミドの環状ＤＮＡを再構築させる工程とを含む環状ＤＮＡの増幅方法である。なお環状ＤＮＡはｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡのプラスミドライブラリーの遺伝子ライブラリーを形成し、形質転換はエレクトロポレーション法又はコンピテント細胞法により行われる。また、環状ＤＮＡを鋳型としマンガンイオン添加による複製の忠実度を低下させる条件下でローリングサークル型増幅法によりＤＮＡを増幅し直鎖状ＤＮＡからなる増幅産物を得る工程と得られた増幅産物を用いて原核細胞又は真核細胞の宿主細胞を形質転換し、宿主細胞内で環状ＤＮＡを再構築させる工程とを含む環状ＤＮＡへのランダム変異導入方法である。なお環状ＤＮＡは宿主細胞内で独自に複製可能なプラスミドのＤＮＡである。 |
| 実施実績 |
【無】 |
| 許諾実績 |
【無】 |
| 特許権譲渡 |
【否】
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| 特許権実施許諾 |
【可】
| 実施権条件 |
平成１０年６月２９日付特総第１１７３号特許庁長官通達「特許権等契約ガイドライン」に基づき、案件ごとに協議のうえ決定。 |
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